pcr試劑盒只是用來“放大”DNA的小工具，為什么說它能給基因調(diào)控機(jī)制提供線索？道理很簡單：調(diào)控研究首先要“看見”基因和它們的變化，而pcr試劑盒讓原本極微量的DNA、RNA變得足夠多、足夠清晰，科學(xué)家才能讀出調(diào)控的細(xì)節(jié)。下面分三點說明：

　　1.讓“開關(guān)”狀態(tài)看得見

　　基因調(diào)控的核心是“什么時候開、什么時候關(guān)”。細(xì)胞里的mRNA量直接反映開關(guān)狀態(tài)，但單個細(xì)胞里的mRNA極少，用常規(guī)方法測不到。帶逆轉(zhuǎn)錄步驟的rt-pcr試劑盒把RNA轉(zhuǎn)成cDNA，再擴(kuò)增到可檢測水平，科研人員就能通過產(chǎn)物量判斷某基因在特定時間點是否被激活。例如，比較正常細(xì)胞和藥物處理細(xì)胞的mRNA量，即可發(fā)現(xiàn)藥物誘導(dǎo)或抑制了哪些基因。

　　2.讓“微調(diào)”幅度測得準(zhǔn)

　　調(diào)控不只是“開/關(guān)”，還有“開多大”。實時熒光PCR（qPCR）試劑盒在擴(kuò)增過程中實時采集熒光信號，可精確計算起始模板數(shù)量，誤差常小于2倍。這樣科學(xué)家就能量化轉(zhuǎn)錄因子過表達(dá)或RNA干擾后目標(biāo)基因的變化幅度，進(jìn)而構(gòu)建劑量-效應(yīng)曲線，找出調(diào)控強(qiáng)度與表型的關(guān)系。

　　3.讓“位置”和“結(jié)構(gòu)”信息保留下來

　　傳統(tǒng)PCR擴(kuò)增后只能得到產(chǎn)物長度，但新一代試劑盒加入了高保真酶、帶修飾的引物或可斷裂探針，可在擴(kuò)增同時保留甲基化位點、突變點或可變剪切信息。如亞硫酸氫鹽處理后的DNA，經(jīng)特殊PCR擴(kuò)增，可檢測啟動子區(qū)甲基化程度，揭示表觀遺傳調(diào)控機(jī)制；再如，利用跨越外顯子-內(nèi)含子邊界的引物，可分辨不同剪切變體，從而發(fā)現(xiàn)剪切因子如何微調(diào)蛋白功能。

　　pcr試劑盒本身不做調(diào)控，卻像“放大鏡”和“計數(shù)器”，把基因表達(dá)、修飾、剪切等微弱信號放大到可測范圍，讓研究者得以追蹤基因調(diào)控的全過程。沒有這一步，后面的機(jī)制研究就無從下手，所以說它為基因調(diào)控機(jī)制提供了關(guān)鍵線索。